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固相萃取10大秘訣

更新時(shí)間：2021-06-10瀏覽：2283次

 

固相萃取10大秘訣

北京亙辰科技有限公司（如需轉(zhuǎn)載，請(qǐng)聯(lián)系我們）

1. 了解你的化合物! ?

被分析化合物的特性對(duì)可以執(zhí)行的SPE類型有很大影響(請(qǐng)查閱我們的SPE指南，聯(lián)系北京亙辰科技索要資料)。兩個(gè)最重要的值是目標(biāo)分析物的pKa 和 Log P：?
pKa = 分析物一半電離一半未電離的點(diǎn)。
Log P = 化合物疏水性的量度。

2. 優(yōu)化上樣pH ?

pH 值對(duì)任何SPE方法都有很大影響，可用于優(yōu)化化合物在SPE產(chǎn)品上的保留。
例如，反相方法調(diào)節(jié)pH值以中和分析物上的任何電荷。
這將使它們更具疏水性，提高與樹脂的相互作用。對(duì)于酸性化合物，將pH值調(diào)節(jié)2個(gè)單位低于pKa；對(duì)于堿性化合物，將pH值調(diào)節(jié)2個(gè)單位高于pKa。
 
3. 優(yōu)化洗滌和洗脫強(qiáng)度
當(dāng)時(shí)用混合模式或反相SPE產(chǎn)品時(shí)，可以調(diào)整洗滌和洗脫強(qiáng)度，以獲得最
干凈的提取物。Log P是一個(gè)很好的屬性，可幫助您決定如何設(shè)置。
高Log P－在洗滌步驟中使用更強(qiáng)的有機(jī)強(qiáng)度。
低Log P－降低洗脫溶劑的有機(jī)強(qiáng)度，以抑制疏水干擾，同時(shí)仍能洗脫所選分析物。
 
 4.  新鮮的標(biāo)準(zhǔn)是*！
一些分析物很容易因熱和光而降解，并且在長(zhǎng)期存儲(chǔ)時(shí)會(huì)從溶液中沉淀出來。這將影響校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)和回收率值。在開始之前，請(qǐng)使用新制定的標(biāo)準(zhǔn)開始您的程序。
 
5. 了解你的吸附劑! ?
找出您正在使用的吸附劑的pKa，并將其與您的分析物pKa一起使用，在上樣和洗滌步驟中調(diào)節(jié)溶液的pH值，無需去離子化合物和樹脂（僅限弱離子樹脂）。?
 
6. 吸附劑調(diào)節(jié)
既然您知道了吸附劑的pKa（步驟5），您的吸附劑床就可以被激活并準(zhǔn)備好通過調(diào)節(jié)來結(jié)合分析物。在大多數(shù)基于硅膠的SPE吸附劑中，硅膠與官能化部分鍵合，該部分通常平放在顆粒表面。
 
調(diào)節(jié)步驟（使用與水混溶的有機(jī)溶劑，例如MeOH）使這些鍵合的官能團(tuán)“豎立”在顆粒的頂部，為它們提供最大的表面積，讓感興趣的分析物相互作用／結(jié)合。如果吸附劑是水可濕性的，則可能不需要此步驟，但它可以通過對(duì)吸附劑床進(jìn)行溶劑洗滌來提高提取物的清潔度。
 
7. 順其自然（流速）
流速對(duì)于成功的反相SPE工作流程很重要。保留機(jī)制在很大程度上依賴于吸附劑和目標(biāo)分析物之間相互作用的范德華力。SPE過程中的快速流速會(huì)降低目標(biāo)分析物與吸附劑介質(zhì)正確結(jié)合的能力，并可能導(dǎo)致SPE方法的上樣和洗滌步驟出現(xiàn)突破。緩慢而穩(wěn)定的樣品流為最佳。以小于或等于每秒1滴（~1毫升/分鐘）的流速為目標(biāo)。
 
8．松散包裝與復(fù)合
松散填充的材料會(huì)對(duì)吸附劑床造成許多問題，包括溝流、壓縮、空隙以及由于松散填充后頂部玻璃料缺乏壓縮而導(dǎo)致的床重與床高比差異的不一致（圖1.）。所有這些因素都會(huì)對(duì)測(cè)試的回收率和再現(xiàn)性產(chǎn)生負(fù)面影響?？紤]像Microlute@ CP系列這樣的復(fù)合產(chǎn)品，這些產(chǎn)品旨在消除這些問題并提高SPE方法的回收率和重現(xiàn)性。
Figure 1. MicroluteTM CP, 復(fù)合吸附劑與傳統(tǒng)松散填充SPE
 
9. 洗脫前干燥SPE樹脂
二氧化硅在干燥時(shí)非常容易受到固定相塌陷的影響。在完成SPE程序的最
后洗滌步驟之前，不要讓二氧化硅基樹脂在任何時(shí)候變干——在上樣步驟
中尤其如此。這通過限制分析物和鍵合相之間可能的相互作用來防止回收
率降低。
以下提示適用于聚合物樹脂和二氧化硅樹脂：
  • 執(zhí)行清潔步驟后，確保使用真空或正壓干燥樹脂，直到樹脂*干燥（我們建議使用正壓／真空至少3分鐘）或直到看不到清洗溶劑。
  • 如果您的方法需要干燥和重構(gòu)步驟，干燥樹脂會(huì)顯著縮短干燥時(shí)間，大多數(shù)洗滌溶劑中都存在水，水比大多數(shù)有機(jī)溶劑更難蒸發(fā)。
  • 如果您的方法不需要干燥步驟，則在洗滌步驟后不干燥SPE樹脂會(huì)導(dǎo)致最終進(jìn)樣溶液的濃度降低，從而導(dǎo)致靈敏度降低。
 
10.   最佳干燥
確保您的干燥方法足夠有力以明顯擾亂洗脫溶劑的表面，但不至于導(dǎo)致將溶液從孔中排出的可能性，因?yàn)檫@會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的RSD％和回收率差異。
這可能非常困難，因?yàn)槿軇┧綍?huì)在干燥過程中移動(dòng)。為了克服這個(gè)問題，使用可以編程或自動(dòng)調(diào)整以實(shí)現(xiàn)高效溶劑蒸發(fā)的蒸發(fā)器，例如Porvair Sciences Ultravap@系列蒸發(fā)器，它可以在整個(gè)過程的所有階段優(yōu)化干燥，而沒有任何樣品污染的風(fēng)險(xiǎn)。